El proceso de curación de heridas en el
cuerpo humano presenta dos etapas sucesivas:
a)
En la primera de ellas, la sangre se coagula por la acción de
una proteína llamada fibrina.
b)
Más tarde, estando la herida ya cerrada, entra en acción una
enzima llamada plasmina que dirige la fibrina.
La plasmina debe ser generada a
partir de un precursor inactivo llamado plasminógeno por obra de una proteína
que funciona como activador de plasminógeno
de origen tisular AP t.
A diferencia de lo que
ocurre con activadores no específicos como la estreptoquinasa y la uroquinasa
-ya conocidos para estimular la producción de plasmina a partir de
plasminógeno- el AP-t
tiene una acción que se manifiesta de manera específica ante la presencia de
fibrina, de modo tal que no produce sus efectos a través de todo el torrente
sanguíneo, sino únicamente en aquel punto donde haya un coágulo producido por
la fibrina.
El AP-t
fue localizado tempranamente en el tejido uterino humano, y más tarde, en 1980,
se obtuvieron pequeñas cantidades de él mediante el cultivo de células del melanoma
Bowes, que es responsable de un tumor cutáneo maligno.
El problema radicaba, sin embargo, en que la cantidad del tejido humano
necesaria para llevar el cultivo en cantidades viables para su aplicación terapéutica
era de tal magnitud que virtualmente hacía impracticable este camino del
cultivo. Se advirtió entonces la
utilidad enorme que podría tener la vía alternativa de obtención del AP-t
por bioingeniería, esto es, las técnicas de recombinación del ácido
desoxirribonucleico (ADNr), que ya anteriormente habían conducido a la
producción de otras proteínas humanas, como los interferones, la hormona del
crecimiento y la insulina.
El camino en su esencia consiste en ubicar,
dentro de la cadena del ácido desoxirribonucleico (ADN) existente en el
núcleo de las células portadoras del AP-t,
a aquella porción de dicha cadena que representa el gen responsable de la
producción del AP-t.
Obtenido esto, el siguiente paso es introducir ese gen -mediante las técnicas
propias de la bioingeniería- en los plásmidos portadores de ADN de otra
célula originariamente no productora ni portadora del AP-t para obtener que esa célula huésped, al reproducirse,
"fabrique" o sea portadora del AP-t. La reproducción de esta célula huésped -con el gen
insertado en condiciones estables- conduce así a la producción de AP-t en las
cantidades que se deseen.
A los efectos de mejor comprensión de la
solución técnica alcanzada por los investigadores de Genentech
los siguientes pasajes tomados de la memoria
descriptiva, que acompañaba su solicitud de patente, pueden ser
esclarecedores:
"El presente invento se
relaciona con activador de plasminógeno humano, correspondiente al que se
encuentra en el suero y/o tejidos humanos, y con novedosas formas de
composiciones del mismo y particularmente a los medios y métodos para
producirlo de modo homogéneo en cantidades terapéuticamente significativas.
El presente invento surge en parte del descubrimiento de la secuencia de
ADN y de la deducción de la secuencia de aminoácidos del activador de plasminógeno
humano. Este descubrimiento permitió la producción de activador de plasminógeno
humano mediante la aplicación de la tecnología ADNr, lo cual, a su vez,
posibilitó la producción de suficiente cantidad y calidad de material para dar
inicio y llevar a cabo los ensayos animales y clínicos como requisitos previos
a la aprobación de venta, sin los impedimentos de las restricciones
necesariamente inherentes a los medios de aislamiento empleados hasta el
presente que involucran la producción y extracción de cultivos celulares
existentes. Esta invención apunta
a estas realizaciones asociadas en todos sus aspectos...
El producto obtenido mediante microorganismos o sistemas de cultivo
celular manipulados por ingeniería genética brinda la oportunidad de obtener
activador de plasminógeno de tejido humano en una manera mucho más eficiente
de lo que ha sido posible hasta ahora, posibilitando la anteriormente elusiva
explotación comercial. Además, y
según el tipo de células huésped, el activador de plasminógeno de tejido
humano puede llevar asociada glicosilación en mayor o menor medida en comparación
con el material natural. En cualquier caso, el AP-t se encontrará libre de los
contaminantes normalmente asociados con el mismo en su entorno celular
no-recombinante. El presente
invento apunta asimismo a vehículos replicables de expresión de ADN que
albergan secuencias de genes codificadores del
activador de plasminógeno de tejido en forma expresable, a cepas de
microorganismos o cultivos celulares transformados con ellos y a cultivos
microbianos o celulares de dichas cepas o cultivos transformados, capaces de
producir el activador de plasminógeno de tejido humano.
En aun otros aspectos, el presente invento apunta a varios procedimientos
útiles para preparar dichas secuencias de genes, vehículos de expresión de
ADN, cepas de microorganismos y cultivos celulares, y configuraciones específicas
de los mismos. Más aún, este
invento apunta a la preparación de cultivos de fermentación de dichos
microorganismos y cultivos celulares".
Cabe
destacar las siguientes reivindicaciones
reclamadas por Genentech en su solicitud de patente, ante la
correspondiente oficina inglesa:
"1)
Activador recombinante de plasminógeno de tejido humano, esencialmente libre de
otras proteínas de origen humano.
2)
Activador de plasminógeno de tejido humano no acompañado por
glicosilación nativa asociada.
3)
Activador de plasminógeno de tejido humano tal como resulta producido
por la tecnología recombinante de ADN.
4)
Activador de plasminógeno de tejido humano biológicamente
activo en forma esencialmente pura, no acompañado con proteínas con las cuales
se encuentra ordinariamente asociado.
5)
Activador de plasminógeno de tejido humano en sí mismo, de
la clase producida por la expresión de un codificado de secuencia de ADN
recombinante para el mismo en una línea de células de mamíferos.
6)
Activador de plasminógeno de tejido humano de acuerdo con las
reivindicaciones 1-5 que contiene una secuencia de polipéptidos precediendo el
término N del primer aminoácido de dicho activador de plasminógeno de tejido
humano.
7)
Un vector de clonación recombinante que comprende una secuencia de ADN
que codifica el activador de plasminógeno de tejido humano.
8)
Un vector de expresión replicable capaz de expresar, en un
microorganismo transformante o un cultivo celular, la secuencia de ADN según la
reivindicación 7...
9)
El plásmido... o pt-PAtrp12...
16)
Un procedimiento que comprende la expresión ADN que codifica el activador de
plasminógeno de tejido humano en una célula huésped recombinante.
17)
Un procedimiento para producir AP-t humano, el cual proceso comprende:
a)
preparación de un vector de expresión replicable capaz de expresar la
secuencia de ADN que codifica el AP-t humano en una célula huésped;
b)
transformación de un cultivo de células huésped para obtener una célula
huésped recombinante;
c)
cultivo de dichas células huésped recombinantes en condiciones que
permiten la expresión de dicha secuencia de ADN que codifica el AP-t para
producir AP-t humano;
d)
recuperación de dicho AP-t humano".
En síntesis
Genetech reclamó la propiedad sobre: el
"Activador
de plasminógeno de tejido humano; composiciones
farmacéuticas que lo contienen; procedimientos para obtenerlo, y ADN e intermediarios
celulares transformados para ello".
En Inglaterra la patente recibió el nº
2.119.804.
En un pasaje de su voto, el juez Mustill
(miembro del tribunal colegiado que examinó el conflicto en la segunda
instancia, en Londres, Inglaterra) definió el logro de Genentech del
siguiente modo:
1) Genentech ganó la carrera de sintetizar AP-t, esto es llegó
primero a la meta de sintetizar una proteína que tenga la misma secuencia de
aminoácidos e igual configuración espacial que AP-t de origen humano,
pero sin las inevitables impurezas del AP-t
extraído del tejido humano, que era conocido en mayo de 1982 (fecha de
solicitud con prioridad de la patente);
2) la
meta era hacer una proteína que fuera idéntica a la ya existente en la
naturaleza;
3) el
camino usado por Genentech era ya conocido en sus lineamientos generales;
4) el
éxito se debió a haberse obtenido por vez primera un injerto completo por
medio de las técnicas de ADNr;
5) en
su camino hacia la meta Genentech
construyó una cantidad de organismos que nunca habían existido antes, algunos
de los cuales contienen el injerto completo;
estos organismos no tuvieron otra finalidad que la de ser medios para
llegar a un resultado;
6) en
su camino hacia la meta, Genentech descubrió las secuencias de nucleótidos
y aminoácidos del AP-t
"natural"; este
descubrimiento no era una meta en sí, y Genentech no se hubiera
embarcado en lograrlo como objeto de investigación pura;
7) la
publicación del trabajo de Genentech fue valiosa para ulteriores
investigaciones, en primer lugar porque demostró que la proteína deseada podía
ser hecha por métodos recombinantes dentro de las tecnologías existentes; en segundo término, porque al comunicar las secuencias y el
mapa de restricciones permitió a otros investigadores obtener el AP-t
por un camino más directo, con menor costo y en tiempo más breve;
en tercer término, porque permitió a otros investigadores conocer el
camino tomado por Genentech, aunque otros no quisieran repetirlo del
mismo modo.
NOTAS:
