Catálogo de la Colección "Derecho, Economía y Sociedad" Sitio Oficial de la Facultad de Derecho de la Universidad de Buenos Aires

Regulación jurídica de las biotecnologías

Curso dictado por la Dra. Teodora Zamudio

Equipo de docencia e investigación UBA~Derecho

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 Glosario

Investigación e implementación de sistemas de identificación de individuos por tecnicas de biologia molecular (Cap 3 y 4)


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... con especial referencia a los estudios post-mortem.

Tesista  Gustavo Adolfo Penacino.

Director: Dr. Daniel Corach.

Tesis doctoral  aprobada con Sobresaliente 11 de diciembre de 1997 Area Biologia Molecular

Universidad de Buenos Aires, Argentina.

Contacto actual con el autor: Director Unidad de Análisis de ADN, Colegio Oficial de Farmacéuticos y Bioquímicos, Rocamora 4045, Buenos Aires, Argentina. Tel/fax: (54) (11) 4862-1142. E-mail: gpenacino@wwiecorp.com. Website: www.adn.ac www.secretpaternity.com

3 Materiales

3.1-Fluidos corporales:

3.2 Pelos

3.3 Uñas

3.4 Restos humanos

3.5 Reactivos

4 Métodos

4.1 Procedimientos de extraccion de adn:

4.2 Purificacion del adn aislado:

4.3 Cuantificacion del adn purificado:

4.4 Analisis de adn de alto peso molecular

4.5 Analisis de adn en condiciones variables de degradacion: los métodos de PCR (Reacción en cadena de la polimerasa).

4.6 Desarrollo de sistemas "multiplex" de aplicacion forense.

 

1 Resumen 2 Introducción 3 Materiales 4 Métodos 5 Resultados 6 Discusión 7 Conclusiones 8 Bibliografia

 

3 Materiales

3.1-Fluidos corporales:

Fluídos corporales obtenidos experimentalmente

En estado líquido (sin soporte):

Se emplearon muestras de sangre anticoagulada con EDTA al 5% y de semen sin tratamiento previo, obtenidas de donantes voluntarios.

Fluídos biológicos en soportes sólidos:

Manchas de Sangre.

Se emplearon, para la implementación de las técnicas de extracción y purificación de ADN, muestras de sangre de un mililitro cada una, voluntariamente cedidas por donantes.

Estas muestras fueron distribuídas sobre diferentes soportes: papel de diario, tela de algodón y vidrio. El material seco así depositado y expuesto a temperatura ambiente dentro del laboratorio, fue posteriormente empleado para extraer ADN. Con el objeto de evaluar la eficiencia de las técnicas de extracción usadas y comprobar la antigüedad máxima de las manchas a ser analizadas, las extracciones se llevaron a cabo sobre media mancha (equivalente a 0,5 mililitros de sangre), a intervalos regulares de tiempo (desde tiempo=0 hasta veinte meses).

Las muestras obtenidas se resumen en la tabla I.

TABLA I

TIEMPO (días)

SOPORTES

 

VIDRIO

PAPEL

TELA

0

muestra a1

muestra b1

muestra c1

4

muestra a2

muestra b2

muestra c2

30

muestra a3

muestra b3

muestra c3

70

muestra a4

muestra b4

muestra c4

100

muestra a5

muestra b5

muestra c5

300

muestra a6

muestra b6

muestra c6

600

muestra a7

muestra b7

muestra c7

Mezclas de Semen/sangre.

Para implementar y desarrollar sistemas eficientes de purificación de ADN a partir de mezclas de semen y sangre, semejante a las halladas en los hisopados obtenidos luego del ataque sexual, se depositaron sobre hebras de algodón muestras de sangre/semen en diferentes proporciones, entre 5 y 500 ul de cada fluído. La evaluación del sistema de extracción se realizó mediante la comparación de los patrones de hibridación obtenidos luego del sondeo con secuencias de locus específico. Las mezclas se prepararon de acuerdo a la tabla II.

TABLA II

MUESTRA Nro.

SANGRE (ul)

SEMEN (ul)

1

500

0

2

495

5

3

450

50

4

400

100

5

250

250

6

0

500

Muestras obtenidas de casos reales

Muestras forenses provenientes de violaciones

Se analizaron los materiales que se detallan en la TABLA III. En éstas se considera cada caso en particular, numerado en forma correlativa (Caso nro.), el material analizado, de acuerdo a las siguientes abreviaturas y correspondiente detalle: HV, hisopado vaginal; HR, hisopado rectal; SD, sangre de la damnificada; SS, sangre del sospechoso; PR, prenda.

Los números indican cantidades de hisopados, muestras de sangre o prendas.

TABLA III

CASO

MUESTRAS

CASO

MUESTRAS

1

1HV, 1SD, 3PR, uñas víct.

22

1HV, 1SD, 1PR

2

1HV

23

1SS, 4PR

3

1SS, 1PR

24

1HV

4

1HV, 1HR

25

1HV, 1SD, 1PR

5

1HV

26

2SD, 1SS, 4PR

6

1HV, 1SD, 1SS

27

1HV, 1SS, 6PR

7

7PR, músculo imput.

28

1SD, 1PR

8

1PR

29

1SD, 1SS, 1PR

9

1SD, 1SS, 3PR

30

1HV

10

1HV

31

2SS, 3PR

11

1PR

32

1SD, 1SS, 1PR

12

4PR

33

1HR, 1SD, 1SS, 1PR

13

3HV, 1SD, 1PR

34

2HV, 1SD, 2PR

14

1PR

35

1HV, 1HR, 1SD, 1PR

15

1SD, 3PR

36

3HV, 2SD, 4SS, 1PR

16

1HV, 1SD

37

1HV, 1SD

17

1HV

38

2HV

18

1SD, 3SS, 1PR

39

1HV, 1HR, 1SD

19

1SD, 1SS, 3PR

40

1HV, 1HR, 1SD, 4PR

20

1HV

41

2SS, 3PR

21

1SS, 2PR

 

 

Otras muestras forenses que involucran fluídos biológicos en soportes sólidos:

CASO NRO.

TIPO DE SOPORTE DE LA MANCHA

 

ABSORBENTE

PARCIALM. ABS.

NO ABSORBENTE

1

tela, apósito

-

-

2

-

-

pinza metálica

3

telas

-

portaobjetos

4

gasa, lona

papel

-

5

gasa (**)

-

-

6

telas

papeles, colillas, piso de cemento

cuchillo, prismáticos

7

tela

-

-

8

tela

-

-

9

-

piso cemento

automóvil (carrocería), colectivo (carrocería y ruedas), moto (cubiertas)

10

-

-

autostéreo

11

-

-

jeringa c/aguja, cuchillo

12

tela

-

-

13

papel filtro (*)

-

-

14

gasa (*)

-

-

15

-

maderas

-

16

tela (**)

-

-

17

tela

-

-

18

tela

-

preservativo

19

tela

cartón

suela zapatilla

20

-

-

cara imputado

21

tela

-

-

22

tela

-

-

23

papel filtro (*)

-

-

24

tela

-

-

25

tela (**)

-

palo escoba

26

-

papel cuaderno

-

27

-

papel diario

-

28

tela

-

-

29

tela

-

preservativo

30

-

-

preservativo

(*) los casos 13, 14 y 23 corresponden a manchas de sangre embebidas y secas en condiciones óptimas, ya que las dos primeras fueron recibidas en el Servicio de Huellas Digitales Genéticas con motivo del Control de Calidad Internacional de EDNAP (European DNA Profiling), y la restante fué obtenida y remitida por un Laboratorio Forense provincial a los efectos del análisis.

(**) en las muestras correspondientes a los casos 5, 16 y 25 se observa abundante fauna (larvas e insectos), lo cual presupone una conservación inadecuada.

3.2 Pelos

CASO NRO.

CANTIDAD

PRES. DE BULBO

1

5

SI: 1 / NO: 4

2

1

NO

3

2

NO

4

2

SI

5

5

NO

6

1

SI

7

7

SI: 1 / NO: 6

8

6

SI: 3 / NO: 3

9

5

SI

10

1

SI

11

1

SI

12

7

SI

13

4

SI

14

4

SI

TOTAL

51

SI: 30 / NO: 21

3.3 Uñas

Se recibieron siete casos que involucraban uñas provenientes de cadáveres.

3.4 Restos humanos

En colaboración con la Justicia Nacional y Juzgados Provinciales, se analizó material procedente de cadáveres en estado de descomposición diverso.

Muestras empleadas en el estudio comparativo de métodos de extracción de ADN (pK/SDS vs. CTAB).

TABLA V

MUESTRA Nro.

EDAD

A: adulto; B: feto/bebé

SEXO

M: masc.; F: fem.

ESTADO

(descomp. aparente)

1

B

F

+++

2

A

M

++

3

A

M

++

4

B

M

+

5

B

M

+++

6

A

M

+++

7

B

F

+

8

B

M

+

9

B

F

++

10

B

F

+++

11

A

M

++

12

A

F

+++

13

A

M

++

14

A

F

+

Muestras utilizadas en la determinación de la eficiencia del análisis en material cadavérico

TABLA VI

MUESTRA CADAVERICA.

NO INHUM.

FORMOLIZ.

INHUM. EN SUELO SECO

INHUM. EN SUELO HUM.

INHUM. EN NICHO

FETO/BEBE

7B

1H

1B

1S

2B

1B

5H

1B

NIÑO/ADULTO

5B

1Q

3B

2H

9H

1S

1M

Referencias: B: presencia de tejidos blandos; H: reducción completa (material óseo únicamente); Q: quemados; S: saponificado; M: momificado. Los números indican cantidad de cadáveres estudiados.

Material cadavérico procedente de desastres en masa:

Muestras obtenidas en el atentado a la Embajada de Israel.

NRO.

MAT. REMITIDO

COLOR

DESCOMPOS.

1

TND, pelos, grasa

negro y blanco

++

2

Piel, músculo

rojo

+

3

TND, tierra

negro

+++

4

TND, grasa

rosa y blanco

+

5

Piel

negro

++

6

TND

negro, blanco y rojo

++

7

TND</